酵素触媒によるATPからのリン酸基の移動は、様々な生物学的プロセスにおいて重要な反応である。 ホスホフルクトキナーゼは、フルクトース-6-リン酸からフルクトース-1,6-ビスリン酸へのリン酸化を触媒し、解糖系経路の重要な調節ステップとなる。 ATPによってアロステリックに阻害され、AMPによってアロステリックに活性化されることから、解糖経路を経る際に細胞が必要とするエネルギーが示される。 PFKは、細菌や哺乳類ではホモ4量体（各単量体が2つの類似ドメインを持つ）として、酵母では8量体（4つのα鎖（PFK1）と4つのβ鎖（PFK2）があり、後者は哺乳類の単量体と同様に、2つの類似ドメインを持つ）として存在している。
PFKは約300アミノ酸の長さで、細菌酵素の構造研究により、2つの類似した（α/β）ローブからなることが示されています。1つはATP結合に関与し、もう1つは基質結合部位とアロステリック部位（活性部位とは異なる調節結合部位、しかし酵素活性に影響を与える）の両方を収容しています。 同一の4量体サブユニットが2つの異なるコンフォメーションをとる。「閉じた」状態では、結合したマグネシウムイオンが酵素生成物（ADPとフルクトース-1,6-ビスリン酸）のリン酸基を橋渡しする。「開いた」状態では、マグネシウムイオンがADPのみを結合し、2つの生成物はさらに離れたところにある。
この逆反応は、フルクトース-1,6-ビスホスファターゼという酵素によって触媒されます。 このファミリーの他のメンバー（リボキナーゼファミリーとしても知られている）には、リボキナーゼ（RK）、アデノシンキナーゼ（AK）、イノシンキナーゼ、および1-ホスホフルクトキナーゼが含まれています。 PfkB/RKファミリーのメンバーは、3つの保存された配列モチーフの存在によって識別される。 多くの生物からいくつかのPfKファミリータンパク質の構造が決定されており、このファミリータンパク質の酵素活性は5価イオンの存在に依存することが示されている。 PFKは骨格筋（PFKM）、肝臓（PFKL）、血小板（PFKP）にアイソフォームが存在し、組織特異的な発現と機能を可能にしている。 このアイソフォームは、その組織特異的な環境において、特定の解糖速度に関与しているのではないかと推測されている。 ヒトでは、一部のヒト腫瘍細胞株で解糖速度が上昇し、PFKLの量の増加と相関があることが分かっている
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