A DNA Polimerase é uma enzima biológica vital que está presente na replicação do DNA. No processo, o DNA copia em duas moléculas filhas de DNA e sintetiza uma nova fita de DNA da fita existente, adicionando dNTPs ao DNA em crescimento.
A DNA Polimerase tem dois papéis cruciais na replicação: 5′ a 3′ de actividade de polimerase de exonuclease e 3′ a 5′ de actividade de revisão de exonuclease. Como a polimerase se liga ao DNA, ela adiciona nucleotídeo na direção de 5′ a 3′.
Felizmente, por desactivar a uma temperatura mais elevada, a DNA Polimerase não é adequada para um tipo de replicação chamado Reacção em Cadeia da Polimerase (PCR). A Taq DNA Polimerase, por outro lado, desempenha um papel essencial na PCR.
O que é a Taq Polimerase?
Taq DNA Polimerase é uma polimerase de DNA recombinante altamente termo-estável. O seu nome vem de Thermus aquaticus, a bactéria tolerante ao calor da qual se isola. O peso molecular da Taq Polimerase é 94kD, e amplifica o DNA até 5kb com uma velocidade de alongamento de 0.9-1.2kb/min a 70-75°C.
O que é a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)?
Reação em Cadeia da Polimerase, ou PCR, é uma técnica de replicação que produz numerosas cópias de uma região específica de DNA in vitro (em um tubo de ensaio em vez de um organismo). A PCR é utilizada em várias áreas da biologia e medicina, incluindo a pesquisa em biologia molecular, diagnóstico médico e ecologia.
PCR depende da Taq Polimerase, uma polimerase de DNA termoestável. Também requer iniciadores de DNA que são projetados especificamente para a região de DNA de interesse, assim como DNA modelo e nucleotídeos (blocos de construção de DNA).
Numa reacção de PCR, irá montar os ingredientes chave num tubo, juntamente com os cofactores que a enzima necessita. Os ingredientes passam por repetidos ciclos de aquecimento e arrefecimento que acabam por sintetizar o ADN.
Existem também três passos básicos que deve seguir para obter a PCR, incluindo:
- Desnaturação (96 °C): Aqueça fortemente a reacção para separar, ou desnaturar, os filamentos de ADN.
- recozimento (55-65 °C): Arrefecer a reacção para que os iniciadores se possam ligar às suas sequências complementares no ADN do modelo de uma só corda.
- Extensão (72 °C): Aumentar as temperaturas de reacção para que a Taq polimerase estenda os iniciadores, sintetizando novos filamentos de ADN.
O ciclo repete-se 25-35 vezes numa reacção PCR típica, que geralmente demora 2-4 horas, dependendo da extensão da região de ADN a ser copiada. Se a reação for eficiente, a região alvo pode ir de apenas uma ou poucas cópias a bilhões.
O papel da Taq Polimerase em PCR
Devido ao seu papel fundamental na síntese e amplificação de novas fitas de DNA, a Taq DNA Polimerase é essencial para a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR).
Como outras polimerases de DNA, a Taq Polimerase só pode produzir DNA se tiver um primer, uma sequência curta de 20 nucleotídeos que fornecem um ponto de partida para a síntese de DNA. Contudo, é também uma polimerase de ADN termoestável que pode funcionar a temperaturas mais elevadas.
Taq DNA Polimerase é altamente eficiente, por isso torna-se totalmente funcional quando atinge a sua temperatura óptima. Também tem uma meia-vida de mais de duas horas (a uma temperatura de 92 °C), uma capacidade de amplificação elevada e a capacidade de adicionar 150 nucleotídeos por segundo.
Escolha G-Biosciences for Your PCR Essentials
Em G-Biosciences, oferecemos uma variedade de kits e produtos para suas aplicações de PCR e Taq DNA Polimerase. Para fazer seu pedido, visite nosso site hoje.