John Wilkes Booth zawsze będzie związany z nazwiskiem prezydenta, którego zamordował. Jako aktor, znał się na teatrze, jednak jako agent Południa, w nocy 14 kwietnia 1865 roku Booth wskoczył na scenę z innego powodu.
Urodzony 10 maja 1838 roku w Bel Air, Maryland, Booth jako dziecko wyróżniał się w lekkoatletyce i zajęciach pozalekcyjnych, ale był mniej niż entuzjastycznym uczniem. Jego rodzice byli imigrantami z Anglii. Jego ojciec, Junius, był odnoszącym sukcesy brytyjskim aktorem szekspirowskim, a matka, Mary Ann Holmes, była kochanką Juniusa. Po uczęszczaniu do szkoły w Bel Air, Sparks i Cantonsville w stanie Maryland, Booth poszedł w ślady ojca i rozpoczął pracę w teatrze. Występował w sztukach takich jak Ryszard III w miastach wzdłuż Wschodniego Wybrzeża od 1855 do 1865 roku, kiedy to po raz ostatni pojawił się na scenie jako książę Pescara w Apostacie granym w Ford’s Theater w Waszyngtonie D.C. 18 marca.
Booth miał bardzo aktywną rolę w polityce w latach przed i podczas wojny secesyjnej. Podczas swoich nastoletnich lat był aktywny w Know Nothings, antyimigranckiej partii politycznej. Był pro-niewolniczy i nie znosił abolicjonistów. W 1859 roku, podczas prób do sztuki teatralnej w Richmond, wstąpił do lokalnej milicji, aby móc razem z nimi uczestniczyć w egzekucji Johna Browna. Nienawidził prezydenta Lincolna i był znany z tego, że publicznie potępił administrację Lincolna podczas kilku publicznych wydarzeń. Wszystko stanęło na głowie zimą 1864-65, kiedy Booth i kilku innych spiskowców zebrali się, aby zaplanować porwanie, a następnie zabójstwo Abrahama Lincolna.
Podczas gdy pierwotny plan porwania Prezydenta został odrzucony, Booth i kilku jego współkonspiratorów wybrali plan zabójstwa. W nocy 14 kwietnia 1865 roku Booth po raz kolejny wszedł do Ford’s Theater, gdzie prezydent i pierwsza dama bawili się na przedstawieniu. Boothowi udało się przemknąć obok ochroniarza Lincolna i po cichu wszedł do loży, w której siedział prezydent. Wystrzelił z pistoletu w tył głowy prezydenta i dźgnął majora Henry’ego Rathbone’a, po czym wskoczył na scenę i krzyknął „Sic Semper Tyrannis”, tę samą kwestię wypowiedział Brutus podczas zamachu na Juliusza Cezara, co oznacza „tak zawsze tyranom”. Uważa się, że ten skok złamał Boothowi lewą kostkę. Wycofał się i uciekł ze stolicy.
Booth ruszył na południe, robiąc kilka przystanków w domach sympatyków Konfederacji, jak również nieświadomych obywateli, przekroczył Potomak w Wirginii 23 kwietnia. Rankiem 26 kwietnia żołnierze 16. nowojorskiej kawalerii dogonili go na farmie Richarda Garretta w pobliżu Port Royal. Jego wspólnik, David Herold, poddał się, ale Booth pozostał w stodole Garretta, która szybko została podpalona przez kawalerzystów. Jeden z żołnierzy, Boston Corbett, podszedł do stodoły i twierdził, że widział Bootha mierzącego do niego z pistoletu, więc Corbett wystrzelił ze swojego rewolweru. Kula przecięła rdzeń kręgowy Bootha i sparaliżowała go. John Wilkes Booth zmarł trzy godziny później. Jego ostatnie słowa wypowiedział patrząc na swoje dłonie. „Bezużyteczny, bezużyteczny, bezużyteczny.” Został pochowany w nieoznaczonym grobie na rodzinnej działce na cmentarzu Green Mount w Baltimore.