O ADN polimerază este o enzimă biologică vitală care este prezentă în replicarea ADN-ului. În acest proces, ADN-ul se copiază în două molecule de ADN fiice și sintetizează o nouă catenă de ADN din catena existentă prin adăugarea de dNTP-uri la ADN-ul în creștere.
ADN Polimeraza are două roluri cruciale în replicare: Activitatea de polimerază exonucleazică de la 5′ la 3′ și activitatea de corectare a exonucleazei de la 3′ la 5′. Pe măsură ce polimeraza se leagă de ADN, adaugă nucleotide în direcția de la 5′ la 3′.
Din păcate, deoarece se dezactivează la o temperatură mai ridicată, ADN Polimeraza nu este potrivită pentru un tip de replicare numit Reacție în lanț a polimerazei (PCR). Pe de altă parte, Taq ADN Polimeraza joacă un rol esențial în PCR.
Ce este Taq Polimerază?
Taq ADN Polimerază este o ADN polimerază recombinantă foarte termostabilă. Este denumită după Thermus aquaticus, bacteria tolerantă la căldură din care se izolează. Greutatea moleculară a Taq Polimerazei Taq este de 94kD și amplifică ADN până la 5kb cu o viteză de alungire de 0,9-1,2kb/min la 70-75°C.
Ce este reacția în lanț a polimerazei (PCR)?
Reacția în lanț a polimerazei, sau PCR, este o tehnică de replicare care produce numeroase copii ale unei anumite regiuni de ADN in vitro (într-o eprubetă și nu într-un organism). PCR este utilizată în diverse domenii ale biologiei și medicinei, inclusiv în cercetarea în domeniul biologiei moleculare, în diagnosticul medical și în ecologie.
PCR se bazează pe Taq Polimerază, o ADN polimerază termostabilă. De asemenea, are nevoie de primeri de ADN care sunt concepuți special pentru regiunea de ADN de interes, precum și de ADN șablon și nucleotide (blocuri de construcție ale ADN-ului).
Într-o reacție PCR, veți asambla ingredientele cheie într-un tub, împreună cu cofactorii de care are nevoie enzima. Ingredientele sunt supuse unor cicluri repetate de încălzire și răcire care, în cele din urmă, sintetizează ADN-ul.
Există, de asemenea, trei etape de bază pe care trebuie să le urmați pentru a realiza PCR, inclusiv:
- Denaturarea (96 °C): Încălziți puternic reacția pentru a separa, sau denatura, șirurile de ADN.
- Recoacere (55-65 °C): Răcirea reacției astfel încât amorsele să se poată lega de secvențele lor complementare de pe ADN-ul șablon monocatenar.
- Extensie (72 °C): Ridicați temperaturile reacției astfel încât Taq polimeraza extinde amorsele, sintetizând noi șiruri de ADN.
Ciclul se repetă de 25-35 de ori într-o reacție PCR tipică, care durează în general 2-4 ore, în funcție de lungimea regiunii de ADN care se copiază. Dacă reacția este eficientă, regiunea țintă poate trece de la doar una sau câteva copii la miliarde.
Rolul Taq Polimerazei în PCR
Datorită rolului său cheie în sintetizarea și amplificarea de noi șiruri de ADN, Taq ADN Polimerazei este esențială pentru Reacția în lanț a polimerazei (PCR).
Ca și alte ADN polimeraze, Taq Polimeraza poate produce ADN doar dacă are un primer, o scurtă secvență de 20 de nucleotide care oferă un punct de plecare pentru sinteza ADN. Cu toate acestea, este, de asemenea, o ADN polimerază termostabilă care poate funcționa la temperaturi mai ridicate.
Taq ADN polimeraza este foarte eficientă, astfel încât devine complet funcțională în momentul în care atinge temperatura optimă. De asemenea, are un timp de înjumătățire de peste două ore (la o temperatură de 92 °C), o capacitate mare de amplificare și capacitatea de a adăuga 150 de nucleotide pe secundă.
Alegeți G-Biosciences pentru produsele dumneavoastră esențiale pentru PCR
La G-Biosciences, oferim o varietate de kituri și produse pentru aplicațiile dumneavoastră PCR și Taq ADN Polimerază. Pentru a vă plasa comanda, vizitați site-ul nostru astăzi.
.