John Wilkes Booth bude navždy spojen se jménem prezidenta, kterého zavraždil. Jako herec se v divadle vyznal, jako agent Jihu však v noci 14. dubna 1865 vyskočil Booth na jeviště z jiného důvodu.
Booth se narodil 10. května 1838 v Bel Air v Marylandu a jako dítě vynikal v atletice a mimoškolních aktivitách, nebyl však příliš nadšeným studentem. Jeho rodiče byli oba přistěhovalci z Anglie. Jeho otec Junius byl úspěšný britský shakespearovský herec a matka Mary Ann Holmesová byla Juniova milenka. Poté, co navštěvoval školu v Bel Air, Sparks a Cantonsville v Marylandu, se Booth vydal v otcových stopách a vstoupil do divadla. Ve hrách jako Richard III. vystupoval ve městech na východním pobřeží od roku 1855 až do roku 1865, kdy se 18. března naposledy objevil na jevišti jako vévoda Pescara ve hře The Apostate, která se hrála ve Fordově divadle ve Washingtonu D. C.
Booth se v letech před občanskou válkou a během ní velmi aktivně podílel na politice. V době svého dospívání byl aktivní ve straně Know Nothings, což byla protiimigrační politická strana. Byl pro otroctví a nesnášel abolicionisty. V roce 1859 se při zkoušení divadelní hry v Richmondu přidal k místní domobraně, aby se s ní mohl zúčastnit popravy Johna Browna. Nesnášel prezidenta Lincolna a je známo, že během několika veřejných akcí veřejně odsoudil Lincolnovu vládu. Vše vyvrcholilo v zimě 1864-65, kdy se Booth a několik dalších spiklenců sešlo, aby naplánovali únos a poté atentát na Abrahama Lincolna.
Původní plán na únos prezidenta byl zrušen, Booth a několik jeho spoluspiklenců však zvolili plán atentátu. V noci 14. dubna 1865 Booth opět vstoupil do Fordova divadla, kde si prezident a první dáma užívali představení. Boothovi se podařilo proklouznout kolem Lincolnovy tělesné stráže a tiše vstoupil do hlediště, kde seděl prezident. Vystřelil z pistole do prezidentova týla a bodl majora Henryho Rathbona, načež vyskočil na jeviště a vykřikl „Sic Semper Tyrannis“, stejnou větu, kterou pronesl Brutus při vraždě Julia Caesara, což znamená „tak vždy tyranům“. Předpokládá se, že při skoku si Booth zlomil levý kotník. Odpotácel se a dal se na útěk z hlavního města.
Booth se přesunul na jih, několikrát se zastavil v domech příznivců Konfederace i nevědomých občanů, 23. dubna překročil řeku Potomac do Virginie. Ráno 26. dubna ho na farmě Richarda Garretta poblíž Port Royalu dostihli vojáci 16. newyorské kavalerie. Jeho komplic David Herold se vzdal, ale Booth zůstal v Garrettově stodole, kterou kavaleristé rychle zapálili. Jeden z vojáků, Boston Corbett, se přiblížil ke stodole a tvrdil, že viděl, jak na něj Booth míří pistolí, a tak Corbett vystřelil ze svého revolveru. Kulka přerušila Boothovu míchu a ochromila ho. John Wilkes Booth zemřel o tři hodiny později. Poslední slova pronesl při pohledu na své ruce. „Zbytečné, zbytečné, zbytečné.“ Je pohřben v neoznačeném hrobě na rodinném pozemku na hřbitově Green Mount v Baltimoru.