TEXTO
Descripción
MKI67 es una proteína nuclear de 359-kD comúnmente utilizada para detectar y cuantificar las células en proliferación, con una mayor expresión asociada al crecimiento celular. La expresión de MKI67 refleja la tasa de proliferación celular, y MKI67 se utiliza ampliamente como marcador de diagnóstico en varios tipos de cáncer (resumen de Hou et al., 2011).
Clonación y expresión
Por medio de la inmunotransferencia de una biblioteca de expresión de ADNc, seguida de RT-PCR y RACE de 5 y 3 primos, Schluter et al. (1993) aislaron 2 ADNc que codifican isoformas de Ki-67. La isoforma más corta carece del exón 7. El análisis de Northern blot reveló múltiples transcripciones que van desde aproximadamente 8,9 a 12,5 kb en células proliferantes pero no quiescentes. El análisis de inmunoblot mostró la expresión de proteínas de 320 y 359 kD. El análisis de la secuencia predijo que las isoformas proteicas de corta duración de 2.896 y 3.256 aminoácidos contienen posibles señales de orientación nuclear, más de 200 posibles sitios de fosforilación, 19 sitios de N-miristoilación, 3 sitios de amidación y numerosos sitios PEST.
Schluter et al. (1993) descubrieron que los oligonucleótidos antisentido del Ki-67 inhibían la proliferación celular de forma dependiente de la dosis, lo que sugiere que la expresión de la proteína Ki-67 puede ser un requisito absoluto para la proliferación celular.
Hou et al. (2011) demostraron que el microARN-519D (MIR519D; 614247) estaba regulado a la baja en los carcinomas hepatocelulares (HCC) humanos y que la expresión de MIR519D podía suprimir el crecimiento en la línea celular HCC humana QGY-7703. El análisis bioinformático reveló un posible sitio de unión de MIR519D en la UTR de 3ª generación de MKI67. La sobreexpresión de MIR519D redujo significativamente MKI67 y la formación de colonias por parte de las células QGY-7703. La RT-PCR reveló un aumento general de la expresión de MKI67 y una disminución de la expresión de MIR519D en 10 HCC en comparación con el tejido normal adyacente.
En ratones, Takeo et al. (2013) demostraron que las células madre ungueales (NSC) residen en la matriz ungueal proximal y se definen por la alta expresión de queratina-14 (148066), queratina-17 (148069) y KI67. Los mecanismos que rigen la diferenciación de las NSC están directamente relacionados con su capacidad para orquestar la regeneración de los dedos. Los progenitores tempranos de las uñas experimentan una diferenciación dependiente de Wnt (véase 164820) hacia la uña. Tras la amputación, esta activación de Wnt es necesaria para la regeneración de la uña y también para atraer los nervios que promueven el crecimiento del blastema mesenquimal, lo que conduce a la regeneración del dedo. Las amputaciones proximales a los progenitores ungueales activos por Wnt hacen que no se regenere la uña o el dedo. Sin embargo, la estabilización de la beta-catenina (116806) en la región de las NSC indujo su regeneración. Takeo et al. (2013) concluyeron que sus resultados establecían un vínculo entre la diferenciación de las células madre de la uña y la regeneración del dígito, y sugirieron que las NSC pueden tener el potencial de contribuir al desarrollo de nuevos tratamientos para los amputados.
Cuylen et al. (2016) informaron de que la proteína marcadora de proliferación KI67, codificada por el gen MKI67, un componente de la periferia del cromosoma mitótico, impide que los cromosomas se colapsen en una sola masa de cromatina tras el desmontaje de la envoltura nuclear, permitiendo así la motilidad independiente de los cromosomas y las interacciones eficientes con el huso mitótico. La función de separación cromosómica de KI67 humana no se limitó a un dominio proteico específico, sino que se correlacionó con el tamaño y la carga neta de mutantes de truncamiento que aparentemente carecían de estructura secundaria. Esto sugirió que KI67 forma una barrera de carga estérica y electrostática, similar a los agentes tensioactivos (surfactantes) que dispersan partículas o gotas líquidas separadas en fase en disolventes. La espectroscopia de correlación de fluorescencia mostró una alta densidad de superficie de KI67, y el etiquetado de doble color de ambas terminaciones de la proteína reveló una conformación molecular extendida, indicando arreglos tipo cepillo que son característicos de los surfactantes poliméricos. Cuylen et al. (2016) concluyeron que su estudio dilucidó un papel biomecánico de la periferia del cromosoma mitótico en las células de mamíferos y sugirió que las proteínas naturales pueden funcionar como surfactantes en la compartimentación intracelular.
Cuylen-Haering et al. (2020) demostraron en células HeLa que los grandes componentes citoplasmáticos eran desplazados antes del ensamblaje de la envoltura nuclear por el movimiento de los cromosomas hacia una agrupación densa durante la mitosis. La agrupación se producía cuando los cromosomas se acercaban a los polos de los husos de anafase y estaba mediada por un mecanismo independiente de los microtúbulos en el que participaba Ki67. Ki67 formó cepillos moleculares repulsivos durante las primeras etapas de la mitosis, pero durante la salida mitótica los cepillos se colapsaron y Ki67 promovió la agrupación de cromosomas. La exclusión de los ribosomas maduros del núcleo después de la mitosis dependía de la agrupación de cromosomas regulada por Ki67.
Schluter et al. (1993) determinaron que el gen Ki-67 contiene 15 exones. La región de repetición del Ki-67, dentro de la cual hay un motivo Ki-67 de 22 aminoácidos, está codificada por el exón 13.
A partir del estudio de un panel de híbridos de células somáticas humano-roedor, Schonk et al. (1989) demostraron que un gen implicado en la expresión del antígeno MKI67 está localizado en el cromosoma 10. Mediante hibridación in situ, Fonatsch et al. (1991) regionalizaron el gen MKI67 en el cromosoma 10q25-qter. Por FISH, Traut et al. (1998) mapearon el gen Mki67 del ratón al cromosoma 7F3-F5.