Sterilisering kan åstadkommas med hjälp av en kombination av värme, kemikalier, bestrålning, högt tryck och filtrering, t.ex. ånga under tryck, torrvärme, ultraviolett strålning, steriliseringsmedel i form av gasånga, klordioxidgas osv. Effektiva steriliseringstekniker är viktiga för att arbeta i ett laboratorium och försummelse av detta kan leda till allvarliga konsekvenser, det kan till och med kosta ett liv.
Så vilka är de vanligaste steriliseringsmetoderna i laboratoriet och hur fungerar de? Läs vidare…
Heat Method: Detta är den vanligaste steriliseringsmetoden. Värmen används för att döda mikroberna i ämnet. Steriliseringens omfattning påverkas av värmens temperatur och uppvärmningens varaktighet. På grundval av vilken typ av värme som används kategoriseras värmemetoderna i-
(i) Våtvärme/dampsterilisering- I de flesta laboratorier är detta en allmänt använd metod som görs i autoklaver…. Autoklaver använder ånga som värms upp till 121-134 °C under tryck. Detta är en mycket effektiv metod som dödar/deaktiverar alla mikrober, bakteriesporer och virus. Autoklavering dödar mikrober genom hydrolys och koagulering av cellproteiner, vilket effektivt uppnås genom intensiv värme i närvaro av vatten. Den intensiva värmen kommer från ångan. Tryckad ånga har en hög latent värme och vid 100 °C rymmer den 7 gånger mer värme än vatten vid samma temperatur. I allmänhet kan autoklaver jämföras med en typisk tryckkokare som används för matlagning, med undantag för att nästan all luft avlägsnas från autoklaven innan uppvärmningsprocessen inleds. Steriliseringstekniker med våt värme inkluderar även kokning och pastörisering.
(ii) Sterilisering med torr värme- I denna metod utsätts prover som innehåller bakterier för höga temperaturer antingen genom flamning, förbränning eller en varmluftsugn. Flamning används för metalliska anordningar som nålar, skalpeller, saxar osv. Förbränning används särskilt för inokuleringsslingor som används i mikrobiella kulturer. Slingans metalländan värms upp till rödglöd på lågan. Varmluftsugnen är lämplig för torra material som pulver, vissa metallanordningar, glasvaror etc.
Filtrering är det snabbaste sättet att sterilisera lösningar utan uppvärmning. Denna metod innebär att man filtrerar med en porstorlek som är för liten för att mikrober ska kunna passera igenom. I allmänhet används filter med en pordiameter på 0,2 um för att avlägsna bakterier. Membranfilter är vanligare filter än sintrade filter, seitzfilter eller ljusfilter. Det kan noteras att virus och fager är mycket mindre än bakterier, så filtreringsmetoden är inte tillämplig om dessa är det främsta problemet.
Strålningssterilisering: Denna metod innebär att de förpackade materialen utsätts för strålning (UV-, röntgen- och gammastrålar) för sterilisering. Den största skillnaden mellan olika typer av strålning är deras penetration och därmed deras effektivitet. UV-strålar har låg penetration och är därför mindre effektiva, men de är relativt säkra och kan användas för sterilisering av små områden. Röntgen- och gammastrålar har mycket större genomträngningsförmåga och är därför mer effektiva för sterilisering i stor skala. Det är dock farligare och kräver därför särskild uppmärksamhet. UV-strålning används rutinmässigt för att sterilisera insidan av biologiska säkerhetsskåp mellan användningarna. Röntgenstrålning används för att sterilisera stora förpackningar och pallar med medicinsk utrustning. Gammastrålning används vanligen för sterilisering av medicinsk engångsutrustning, t.ex. sprutor, nålar, kanyler och droppset, samt livsmedel.
Kemisk metod för sterilisering: Uppvärmning ger ett tillförlitligt sätt att bli av med alla mikrober, men det är inte alltid lämpligt eftersom det kan skada det material som ska steriliseras. I det fallet används kemiska metoder för sterilisering som innebär att skadliga vätskor och giftiga gaser används utan att materialet påverkas. Sterilisering är effektiv med hjälp av gaser eftersom de tränger snabbt in i materialet som ånga. Det finns några risker, och risken för explosion och kostnadsfaktorer måste beaktas.
De vanligaste gaserna för sterilisering är en kombination av etylenoxid och koldioxid. Här tillsätts koldioxid för att minimera risken för en explosion. Ozongas är ett annat alternativ som oxiderar de flesta organiska ämnen. Väteperoxid, kvävedioxid, glutaraldehyd- och formaldehydlösningar, ftalaldehyd och perättiksyra är andra exempel på kemikalier som används för sterilisering. Etanol och IPA är bra på att döda mikrobiella celler, men de har ingen effekt på sporer.